换一批半巢式PCR法构建天然噬菌体单域重链抗体文库
Construction of Alpaca-derived Naive Single-domain Antibody Phage Display Library by Semi-nested PCR
摘要目的:构建天然噬菌体单域重链抗体文库,淘选可应用于食品安全检测的单域重链抗体.方法:以未经免疫的健康羊驼(Lama pacos)外周血为起始材料,提取RNA反转录为cDNA,根据重链抗体保守序列设计引物,通过半巢式PCR法扩增获得全套重链抗体可变区编码基因,将其克隆至噬菌粒pHEN1,电转化大肠杆菌TG1得到初级抗体库,辅助噬菌体KM13感染后得到噬菌体展示库.采用固相淘选法分别对3种人工抗原进行淘选.结果:单域重链抗体编码基因得到有效扩增,经10次电转化获得初级文库,命名为SNAL,实际库容量达到1.6×107个独立克隆,菌落PCR鉴定结果表明,克隆效率约为87%,辅助噬菌体救援后得到的展示文库命名为SNA-PDL,滴度达1013CFU/mL.对3种不同人工抗原DON-MBSA、NOR-BSA和AFB1-OVA的淘选均有富集现象.结论:构建了天然噬菌体单域重链抗体文库,文库的多样性较好,可以用于后续淘选.
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发布时间
2011-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
江西省教育厅青年科学基金（09C26213604449;GJJ09442）
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