换一批苍白芽孢杆菌D-阿拉伯糖异构酶克隆表达及D-塔格糖制备
Cloning and Expression of D-Arabinose Isomerase from Geobacillus pallidus and Its Application in D-Tagatose Conversion
摘要目的:利用筛选出的一株能产D-阿拉伯糖异构酶(D-AI)的耐热菌株,将D-半乳糖转化为D-塔格糖.方法:从实验室保藏的菌株中筛选出一个产D-阿拉伯糖异构酶能力较强的苍白芽孢杆菌,将该菌株中的D-阿拉伯糖异构酶基因D-AI克隆到载体pET-28a上,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达.通过SDS-PAGE分析发现,重组菌株能表达出大量可溶性蛋白.结果:D-阿拉伯糖异构酶纯化酶的最适反应pH值和温度分别是7.0和60℃,在pH6.0～8.0范围和30～70℃范围内具有较好的稳定性.加入Mn2+、Zn2+、Fe2+、Ca2+和Ba2+均能够使D-塔格糖的转化率提高,而Mg2+和Cu2+则对酶活力产生不同程度的抑制.结果表明:底物质量浓度为18g/L的D-半乳糖(含5mmol/L Mn2+),加入到pH值为7.0的重组细胞粗酶液中,在60℃条件下反应12h,可达到最高转化率为41.6％.结论:这表明具有生物活性的重组D-AI大肠杆菌E.coli(BL21)中成功表达且具备工业化生产D-塔格糖的潜能.
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