换一批猪背最长肌PFK-2/FBPase-2荧光定量RT-PCR方法的建立
Development of RT-PCR Assay for PFK-2/FBPase-2 in Swine longissimus dorsi Muscle
摘要为研究糖酵解关键酶果糖-6-磷酸-2激酶/果糖-2,6-二磷酸酯酶(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase,PFK-2/FBPase-2)基因转录水平与宰后肉品质间的关系,根据猪PFK-2/FBPase-2 mRNA序列(GenBank登录号:NM_ 001143721.1)设计一对特异性引物并选择β-actin作为内参基因,构建含有各自序列的重组质粒标准品,通过对反应条件的优化,建立了荧光定量实时-聚合酶链式反应技术检测猪PFK-2/FBPase-2基因转录水平的方法.结果表明,所建立的方法线性关系好,目的基因与内参基因R2均大于0.999;灵敏度高,两基因检出下限均为10拷贝/μL;特异性好,扩增产物均有特异性单一峰.同时根据标准曲线计算可知目的基因与内参基因的扩增效率分别为104.5％和104.0％,扩增效率接近一致,可对PFK-2/FBPase-2转录水平进行相对定量.本研究选取PSE肉产生程度不同的三元杂交猪、杜洛克猪和太湖猪,利用建立的方法对不同品种猪宰后45 min背最长肌中PFK-2/FBPase-2 mRNA转录水平进行测定,结果表明,太湖猪转录水平最高、杜洛克次之、三元杂交猪最低,且3个品种间有显著性差异(P＜0.05).
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关键词
猪PFK-2/FBPase-2 mRNASYBR Green Ⅰ荧光定量实时-聚合酶链式反应swinePFK-2/FBPase-2mRNASYBRGreenⅠrealtime-polymerasechainreaction(RT-PCR)
分类号
TS251.1
栏目名称
DOI
10.7506/spkx1002-6630-201414022
发布时间
2014-09-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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