换一批基于质谱检测转基因生物外源蛋白质的消化稳定性
Mass Spectrometry-Based Analysis of Digestive Stability of Target Protein in Genetically Modified Organism
摘要基于无标记定量质谱检测技术建立了一种新的转基因生物外源蛋白质消化稳定性评价方法。以牛β-乳球蛋白、牛血清白蛋白和大豆胰蛋白酶抑制剂为标准蛋白质，经模拟人体胃/肠消化液消化后进行凝胶电泳分离，切取目标蛋白质条带进行酶切，提取肽段进行纳升液相色谱-电喷雾串联质谱分析。基于Mascot数据库检索鉴定目标蛋白质。计算各消化时间点蛋白质匹配肽段数与消化前蛋白质匹配肽段数的比值，当比值≤0.50时判断为目标蛋白质在该时间段内已消化。将此方法应用于转基因抗虫水稻“华恢1号”外源蛋白Cry1Ab/1Ac的消化稳定性分析，结果显示在模拟胃液中消化2 min时，比值下降到0.50以下，在模拟肠液中消化15 s后比值下降到0.50以下，表明该蛋白在胃/肠消化液中具有消化不稳定性。
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关键词
转基因生物消化稳定性质谱外源蛋白Cry1Ab/1Ac无标记定量genetically modified organismsdigestive stabilitymass spectrometryexogenous protein Cry1Ab/1Aclable-free quantification
分类号
TS207.3
栏目名称
DOI
10.7506/spkx1002-6630-201619011
发布时间
2016-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家科技重大专项（(2014ZX08011007；2016ZX08011007)）
国家重大科学仪器设备开发专项（(2012YQ180117)）
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