实时荧光定量RT-PCR法快速定量检测果蔬中星状病毒

Development of a Real-Time Fluorescent RT-PCR Assay for Quantitative Detection of Astrovirus in Fruits and Vegetables

二维码有效期 120s

摘要目的:针对不同果蔬表面建立星状病毒富集与RNA提取方法,结合已报道的实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)引物和探针,实现果蔬中星状病毒的高灵敏快速定量检测.方法:利用10倍梯度稀释的星状病毒cRNA分子检测Ct值及其对应的初始浓度,构建标准曲线,为星状病毒的定量检测提供参考.将ISO/TS 15216-2:2013针对果蔬中诺如病毒和甲肝病毒RNA的提取方法用于星状病毒的检测,利用人工感染的大白菜和草莓样品,分析病毒回收率、灵敏度及检测重复性.最终通过60份果蔬样品的检测验证该方法的实用性.结果:所建立的实时荧光定量RT-PCR方法扩增效率达95.9％,检测低限为5.6拷贝/反应.人工感染的大白菜样品中病毒回收率在0.94％～9.63％之间,而人工感染草莓样品中病毒回收率最高达1.03％.对同一感染浓度的样品在不同时间的检测结果变异系数均小于2％.最终检出1份来自北京农贸市场的草莓样品为星状病毒阳性,检测阳性率达1.67％.结论:建立的果蔬中星状病毒荧光RT-PCR定量检测方法快速、高效、灵敏,在食源性病毒的日常筛查和风险评估工作中具有重要的应用价值.