换一批基于定向进化技术提高地衣芽孢杆菌L-天冬酰胺酶活性
Improving L-Asparaginase Activity from Bacillus licheniformis by Directed Evolution
摘要为提高地衣芽孢杆菌L-天冬酰胺酶活性,通过定向进化技术对其进行分子改造.经过两轮易错聚合酶链式反应和一轮DNA shuffling,从19 100多个突变株中筛选到突变体S10、S16和S21,其酶比活力较野生型分别提高了106％、74％和43％,且突变酶Kcat/Km都有所增大.其中,突变体S10氨基酸序列发生3个突变,K43E、N67S和1269L.三维模拟结果显示,第43位氨基酸突变为谷氨酸、第67位氨基酸突变为丝氨酸,可能提高了底物亲和力和催化效率,从而提高酶活性.圆二色谱分析表明,相比野生酶,突变酶的a-螺旋数减少、无规则卷曲有所增加,表明其刚性略有降低,柔性有所增加.利用定向进化策略能够有效地提高地衣芽孢杆菌L-天冬酰胺酶活性.
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