换一批白丝北里孢菌L-谷氨酸氧化酶的异源表达及酶学性质分析
Heterologous Expression and Characterization of Recombinant L-Glutamate Oxidase from Kitasatospora setae
摘要为实现从L-谷氨酸到α-酮戊二酸(α-ketoglutaric acid,α-KG)的高效生物转化,将来源于白丝北里孢菌(Kitasatospora setae KM-6054)的L-谷氨酸氧化酶(L-glutamate oxidase,LGOX)在大肠杆菌(Escherichia coli)中实现异源表达,并研究其酶学特性.根据LGOX的氨基酸序列和大肠杆菌系统偏好性合成LGOX全基因序列,并通过pET28a(+)/DE3系统在大肠杆菌中实现了功能表达.诱导剂异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)终浓度为0.1 mmol/L,20℃诱导18h,重组大肠杆菌粗酶液酶活力可达49.10 U/mL.亲和层析获得酶比活力为45.98 U/mg纯酶,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳条带显示蛋白分子质量大小约为70 kDa.酶学性质研究表明:其最适反应温度和pH值分别为40℃和6.0;Km值为1.23 mmol/L,Vmax值为76.24 μmol/ (min·mg),L-谷氨酸为该酶的最适底物.本研究确定了LGOX在E.coli BL21中的异源表达及酶学特性,为生物转化合成α-KG提供了新的参考途径.
更多相关知识
关键词
白丝北里孢菌L-谷氨酸氧化酶α-酮戊二酸异源表达酶学性质Kitasatospora setaeL-glutamate oxidaseα-ketoglutaric acidheterologous expressionenzymatic properties
分类号
Q814
栏目名称
DOI
10.7506/spkx1002-6630-201802010
发布时间
2018-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金青年科学基金项目（31401674）；
“十三五”国家重点研发计划重点专项（2016YFD0401404）
- 浏览3
- 被引6
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
