换一批重组降血压肽ACEIP的表达及活性鉴定
Expression and Activity Identification of Recombinant Antihypertensive Peptide(Angiotensin I-Converting Enzyme Inhibitory Peptide)
摘要选择降血压肽WQVLPNAVPAK,人工合成大肠杆菌密码子优化后六串联体血管紧张素转换酶抑制肽(angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptide,ACEIP)基因片段ACEIP,将其克隆至表达载体pET30a后构建重组质粒pET30a-ACEIP.该重组质粒经限制性内切酶NdeI和HindⅢ双酶切鉴定、菌落聚合酶链式反应鉴定后,将其化转至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,构建了表达工程菌大肠杆菌BL21(DE3)/pET30a-ACEIP.工程菌经终浓度为0.8 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷导后,Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示在分子质量约为8.7 kDa处出现一条明显条带.经Ni2+亲和层析、肠激酶酶切后纯化得到串联多肽ACEIP.其中融合蛋白的表达量为61.30mg/L,串联多肽ACEIP的表达量为57.84mg/L.串联多肽经胰蛋白酶酶解后的IC50值为6.39mg/mL,ACE抑制活性高于单体肽WQVLPNAVPAK的抑制活性(IC50为12.34mg/mL).
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