换一批摘要随着细胞培育肉产业的快速发展,应用于细胞培育肉生产的细胞规模化培养技术受到广泛关注.本研究采用3DTableTrixTM和Cytodex1两种微载体在转瓶中对成肌细胞进行悬浮培养,筛选出更适于成肌细胞大规模培养的微载体,进而采用单因素控制变量法探讨了不同培养条件对细胞大规模培养的影响.两种微载体的显微示意图显示,Cytodex 1是一种表面光滑且无大孔结构的球体,3DTableTrixTM是一种表面多孔且孔隙较大的不规则球体.细胞转瓶培养结果显示,细胞在3DTableTrixTM上生长更加高效,培养10 d后细胞收获量为8.97× 105个/mL.优化细胞在3DTableTrixTM的培养条件,结果显示,在细胞贴壁期,以40 r/min速率搅拌10 min、静置50 min的间隔搅拌方式培养最佳;在细胞接种密度1×105个/mL、微载体质量浓度2mg/mL、搅拌速率40 r/min的条件下,初始培养血清体积分数为20％,培养24 h后更换为血清体积分数10％的培养基,并采用隔天更换50％培养基的补料方式,可获得最佳的细胞培养效率.通过微载体的珠对珠转移,将细胞转移至2 L转瓶,最终收获细胞数量1.07×109个,存活率达到95％以上.带有细胞的微载体还可以冻存和复苏,并且和解冻细胞的增殖状况和形态没有显著差异.优化后的培养工艺实现了在转瓶中成肌细胞高效的大规模培养,并在工业化大规模生产细胞培育肉领域具有良好的应用前景.
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