4种植物源性成分多重real-time PCR检测方法的建立及其在食用淀粉中的应用
Establishment of a Multiplex Real-Time PCR Method for Detection of Four Plant-Derived Components and Its Application to Edible Starches
摘要建立一种可同时快速检测红薯、木薯、马铃薯、玉米源性成分的多重实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)方法.分别以红薯g3pdh基因、木薯g3pdh基因、马铃薯UGPase基因、玉米zSSIIb基因为靶基因设计特异性引物和TaqMan探针,以18S rRNA基因为内参基因,建立多重real-time PCR方法,开展方法学验证,并对不同掺入比例模拟样品和实际淀粉样品进行检测.结果显示,该方法具有高通量、特异性强、灵敏度高等优点.与15种非目标源性均无交叉反应;对目标DNA的检测灵敏度可达到3×10-3ng/μL,且具有良好的线性关系和扩增效率;对淀粉样品的检出限可达0.1%,对50份实际样品进行检测,结果与参比方法一致,说明建立的多重real-time PCR法可用于食用淀粉种类掺假鉴别检测.
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