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拟穴青蟹精氨酸激酶的重组表达及致敏性分析

Recombinant Expression and Allergenicity Analysis of Arginine Kinase from Scylla paramamosain

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摘要为比较拟穴青蟹(Scylla paramamosain)重组精氨酸激酶(recombinant arginine kinase,rAK)和天然AK(native AK,nAK)的致敏性,并鉴定AK分子中的致敏优势区域,首先基于AK的抗原表位分布与空间结构,将AK分子分为AK-E1(氨基酸(amino acids,AA)1～92)、AK-E2(AA 87～187)、AK-E3(AA 172～265)和AK-E4(AA 276～357)4 个片段,采用大肠杆菌原核表达系统对其进行分段表达,并分别分离纯化nAK、rAK及AK的4 个分段表达产物.用BALB/c小鼠模型评价重组蛋白的致敏性,结果显示,rAK致敏小鼠血清中特异性抗体水平、脾脏淋巴细胞的Th2型细胞因子释放水平均显著升高,表明rAK可使机体致敏,但其免疫原性较nAK弱;AK的4个分段表达产物中AK-E2的免疫原性最强.同时,rAK能够刺激RBL-2H3细胞释放β-己糖苷酶,但rAK对效应细胞的刺激作用低于nAK;4个分段表达产物中AK-E2和AK-E4对效应细胞的刺激作用较强.综上,通过原核表达系统获得的rAK免疫原性较nAK弱,而AK分子中免疫原性较强的区域为AA 87～187,免疫反应性较强的区域为AA 276～357.

作者杨阳 ^[1] 何欣蓉 ^[2] 何少贵 ^[3] 陈锦莉 ^[4] 刘萌 ^[5] 费丹霞 ^[2] 毛海燕 ^[2] 刘光明 ^[2] 学术成果认领

作者单位厦门华厦学院环境与公共健康学院,福建厦门 361024;集美大学海洋食品与生物工程学院,福建厦门 361021 ^[1] 集美大学海洋食品与生物工程学院,福建厦门 361021 ^[2] 翔安创新实验室,福建厦门 361104 ^[3] 厦门华厦学院环境与公共健康学院,福建厦门 361024 ^[4] 厦门海洋职业技术学院海洋生物学院,福建厦门 361102 ^[5]

关键词拟穴青蟹精氨酸激酶重组蛋白致敏性 BALB/c小鼠 Scylla paramamosain arginine kinase recombinant protein allergenicity BALB/c mice

分类号 Q789（分子生物学基因工程《遗传工程》）

栏目名称

食物过敏原致敏性专栏

DOI 10.7506/spkx1002-6630-20230818-130

发布时间 2024-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

基金项目

福建省自然科学基金面上项目（2023J011666）国家自然科学基金（31901811）国家自然科学基金（32001695）国家自然科学基金（32072336）