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基于体温扩增的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒致病变种3种可视化快速检测方法的建立

Establishment of Three Rapid Visual Detection Methods for Burkholderia gladioli pv.cocovenenans Based on Body Temperature Amplification

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摘要为实现食品中唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒致病变种(Burkholderia gladioli pv.cocovenenans)的快速检测,基于体温扩增技术——酶促重组等温扩增(enzymatic recombinase amplification,ERA),并根据唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒致病变种bonM基因序列设计和筛选了ERA检测引物和探针,分别建立ERA显色法、荧光法、试纸条法3种可视化快速检测方法,并评估其特异性和灵敏度,以及在市售样品检测适用性和准确性.结果显示,建立的方法对3株唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒致病型菌株均有扩增,其他常见的食源性致病菌以及其他唐菖蒲伯克霍尔德氏菌均无扩增,说明检测方法的特异性良好.3种方法的检出限均为10-2ng/μL,灵敏度较好.采用建立的3种可视化快速检测方法对15份市售样品进行检测,检出阳性2份,检出率为13.3％.该结果与国标方法的检测结果一致,说明方法具有较好的适用性和准确性.本研究建立的基于体温扩增技术的显色法、荧光法和试纸条法具有较高的特异性及灵敏度,37 ℃体温扩增15 min左右即可获取检测结果,且裸眼可视,可为食品中唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒致病变种的现场可视化快速筛查提供新型简便的策略.

作者林志伟 ^[1] 王帅 ^[2] 蔡杰 ^[3] 聂丹丹 ^[4] 李涛 ^[3] 李红娜 ^[3] 杨艳歌 ^[3] 袁飞 ^[3] 学术成果认领

作者单位黑龙江八一农垦大学农学院,黑龙江大庆 163000 ^[1] 中国检验检疫科学研究院,国家市场监管重点实验室(食品质量与安全),北京 100176;黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院,黑龙江大庆 163000 ^[2] 中国检验检疫科学研究院,国家市场监管重点实验室(食品质量与安全),北京 100176 ^[3] 长春海关技术中心,吉林长春 130062 ^[4]

关键词唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒致病变种酶促等温扩增技术可视化快速检测 Burkholderia gladioli pv.cocovenenans enzymatic recombinase amplification visualization rapid detection

分类号 TS207.4

栏目名称

安全检测

DOI 10.7506/spkx1002-6630-20230621-169

发布时间 2024-05-16

基金项目

国家市场监督管理总局技术保障专项（2023YJ17）；国家重点研发计划（2022YFF0607900）