换一批环糊精葡萄糖基转移酶my20结构域删除突变体的表达和酶学性能
Expression and Enzymatic Properties of Domain-Deleted Mutants of Cyclodextrin Glucosyltransferase my20
摘要本实验以海洋来源的环糊精葡萄糖基转移酶(cyclodextrin glycosyltransferase,CGTase)my20为研究对象,构建了D、E以及DE结构域截短突变体,通过pET-24a载体和宿主菌E.coli BL21(DE3)进行异源表达,并利用镍亲和层析柱纯化得到纯酶.以my20环化比活力为100％计,my20△D、my20△E、my20△DE相对环化活力分别约为197％、22％、17％,表明E结构域是CGTase催化环化反应的重要结构域,D结构域的存在可能降低了底物分子进入催化结构域的能力.my20为耐热酶,3种截短突变酶相较之下耐热性均有不同程度的降低,说明D、E结构域在CGTase耐热性方面具有重要的作用.my20在缺失了DE结构域后,催化产物中α-环糊精占比相较其他截短酶提升约8％,表明缺失DE结构域影响其产物的特异性.本实验结果可为CGTase通过结构域改造在工业生产方面发挥作用提供一定的理论基础.
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关键词
环糊精葡萄糖基转移酶结构域环化活力酶学性质cyclodextrin glucosyltransferasedomaincyclization activityenzymatic properties
分类号
Q71（生物大分子的结构和功能）
栏目名称
DOI
10.7506/spkx1002-6630-20240201-002
发布时间
2024-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
江苏省海洋生物资源与环境重点实验室开放课题基金项目（SH20211201）
中国水产科学研究院基本科研业务费项目（2023TD71）
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