换一批副溶血性弧菌噬菌体vB_VpP_1裂解酶的生物信息学分析、原核表达及生物活性鉴定
Bioinformatics Analysis,Prokaryotic Expression and Biological Activity of Lysin from Vibrio parahaemolyticus Phage vB_VpP_1
摘要为了研究副溶血性弧菌噬菌体vB_VpP_1裂解酶重组表达后对副溶血性弧菌的体外裂解作用,本实验根据全基因组测序及功能分析结果初步判断噬菌体vB_VpP_1的gp32基因片段为裂解酶基因,使用Expasy等工具分析了gp32的氨基酸序列组成和结构等;使用Primer 5.0软件设计引物后克隆至pET-28a(+)载体进行原核表达;纯化后的裂解酶作用于宿主菌及乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)处理后的宿主菌,测定裂解酶的活性.结果表明,vB_VpP_1裂解酶的三级结构为球形亲水蛋白,预测含有2 个催化结构域,符合革兰氏阴性菌噬菌体裂解酶的基本特征,不存在跨膜区域及信号肽.纯化后的噬菌体vB_VpP_1裂解酶活力约为(1 487±182)U/mg,对已被EDTA破坏细胞壁外膜的副溶血性弧菌表现出较强的裂解能力,但不能有效裂解细胞壁完好的副溶血性弧菌.本研究成功构建噬菌体vB_VpP_1裂解酶原核表达载体,表达、纯化后的裂解酶能够裂解细胞壁被破坏的副溶血性弧菌.
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分类号
TS201.3
栏目名称
DOI
10.7506/spkx1002-6630-20240513-101
发布时间
2025-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
渤海大学海洋研究院项目（BDHYYJY2024003）
渤海大学食品科学与工程学院预研项目
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