仿刺参肠高抗凝血活性多糖筛选及其结构解析
Screening and Structural Analysis of a Polysaccharide with High Anticoagulant Activity from the Intestine of Apostichopus japonicus
摘要以仿刺参肠为原料,提取得到粗多糖,经Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换色谱柱分离得到3 种多糖(SCG1~SCG3).采用PMP柱前衍生高效液相色谱法、高效凝胶渗透色谱法对3 种多糖的单糖组成、分子质量进行分析;采用活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、凝血酶时间(thrombin time,TT)、凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)含量评价多糖的抗凝血活性,筛选高抗凝血活性多糖;通过理化性质分析、红外光谱分析、核磁共振波谱分析对高抗凝血活性多糖进行结构分析.结果显示,仿刺参粗多糖的提取得率为2.75%,按照多糖SCG1~SCG3的顺序,岩藻糖的比例逐渐升高,SCG3仅含有岩藻糖;分子质量逐渐升高,其中SCG3分子质量为171.5 kDa.3 种多糖对APTT延长作用逐渐增强,SCG3的延长作用高于阳性对照低肝素,20μg/mL时可达500 s以上;SCG3对PT延长作用最强,200μg/mL时可达500 s以上,SCG1、SCG2作用不明显;SCG2、SCG3对TT均有显著延长作用,且SCG3作用最明显,50μg/mL时可达500 s以上,SCG1几乎没有延长作用;SCG3质量浓度超过50μg/mL时可显著降低FIB的含量.因此,SCG3是一种多机制高抗凝血活性多糖.结构分析结果显示,SCG3的总糖质量分数为50.36%,蛋白质量分数为0.67%,硫酸基质量分数为28.31%,表明SCG3是一种硫酸化岩藻多糖,即岩藻聚糖硫酸酯.红外光谱、核磁共振波谱进一步验证SCG3是一种高纯度岩藻聚糖硫酸酯,主要由糖基→3)-α-L-Fucp-(1→、→3)-α-L-Fucp(2SO4)-(1→及→3)-α-L-Fucp(2,4SO4)-(1→组成.
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