质谱导向高效液相色谱一测多评测定葛根提取物中异黄酮的相对含量
Determination of Relative Contents of Isoflavones in Radix Puerariae Extract by Mass Spectrometry Guided High Performance Liquid Chromatography Using Quantitative Analysis of Multi-component with Single Marker
摘要建立一种质谱(mass spectrometry,MS)定性鉴别结合高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法定量分析,并以葛根素为单一外标物的一测多评测定葛根提取物中多种异黄酮类成分相对含量的方法,为保健食品中提取物原料的综合评价提供参考.使用EcoPak C18 Plus色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),以中药材葛根饮片为对照样优化的色谱条件为:流动相体系0.1%氨水溶液(pH 7.5)-乙腈-甲醇(梯度洗脱),进样体积10 μL,检测波长250 nm,柱温(35±0.2)℃,流速0.8 mL/min;MS条件为电喷雾离子源,全离子扫描,负离子模式检测,扫描范围m/z200~1000,电喷雾电压12000 psi,离子源温度为600℃,载气为氮气.结果表明,葛根饮片中异黄酮化合物的分离度良好,高效液相色谱-紫外(high performance liquid chromatography-ultra violet,HPLC-UV)检测中21 个色谱峰重复性较好(相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)<0.7%);MS的21 个离子流峰的保留时间重复性良好(RSD<1.0%),且两者的保留时间可相对应.结合文献研究鉴定了18 个葛根异黄酮化合物发现葛根素质量浓度在0.052~500 μg/mL线性范围内线性关系良好(R2=0.999 2),检出限为0.015μg/mL(信噪比≥3),同时以葛根素为参照,相对定量了18 种葛根异黄酮化合物的含量.植物提取物成分复杂,以质谱定性鉴别具有用量少、操作简单、快速准确的特点,本研究方法可更低成本、方便快捷的综合评价提取物的品质,为葛根类药食同源物质在保健食品开发和应用提供参考.
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