换一批铜绿假单胞菌特异性核酸适配体的筛选及其在菌体检测方面的应用
Selection and Application of Specific Nucleic Acid Aptamers for the Detection of Pseudomonas aeruginosa
摘要为实现对致病菌铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的快速微量检测,本研究首先利用全细胞指数富集的配体系统进化技术,筛选靶向铜绿假单胞菌的特异性单链DNA(single-stranded DNA,ssDNA)适配体.经15 轮富集后共获得30 个ssDNA序列,比较吉布斯自由能ΔG和解离常数Kd后,确定适配体Apt13的特异性和亲和力最佳,可用于铜绿假单胞菌的检测.异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记菌体形成的FITC-P.aeruginosa复合物具有荧光,适配体Apt13的加入可猝灭其荧光,而反筛菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和溶壁微球菌不影响Apt13对FITC-P.aeruginosa荧光的猝灭作用.基于此现象构建了用于铜绿假单胞菌检测的荧光系统.通过适配体Apt13对待测样本中荧光的猝灭情况判断是否存在铜绿假单胞菌.在确定Apt13最佳使用浓度及其与P.aeruginosa孵育的最优时间基础上,Apt13猝灭的荧光强度与铜绿假单胞菌在101～108 CFU/mL范围内呈线性关系,检出限为2 CFU/mL,检测可在2.0 h内完成,并可对水样中铜绿假单胞菌实现有效检测.
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关键词
铜绿假单胞菌全细胞指数富集的配体系统进化技术适配体荧光传感器Pseudomonas aeruginosawhole cell systematic evolution of ligands by exponential enrichmentaptamerfluorometric sensor
分类号
TS207.4
栏目名称
DOI
10.7506/spkx1002-6630-20240921-167
发布时间
2025-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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