换一批α-L-岩藻糖苷酶AlfB的生物信息学分析、异源表达及活性
Bioinformatics Analysis,Heterologous Expression and Activity Analysis of α-L-Fucosidase AlfB
摘要为深入研究GH29A家族α-L-岩藻糖苷酶的结构性质和催化活性,从NCBI数据库中获得鼠李糖乳酪杆菌GG中酶Alf B的编码基因,对Alf B进行生物信息学分析,通过优化重组酶Alf B的产酶条件,实现在大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统中的异源表达.生物信息学分析表明,Alf B为单结构域酶,存在两个保守的活性位点,即亲核催化位点Asp166和酸碱催化位点Glu32.重组酶的最佳诱导产酶条件为温度25℃、时间28 h.实验测得,纯化重组酶的最适反应温度为35℃,最适pH值为6.0,Cu2+对其有强烈抑制作用,Mn2+对其有强烈激活作用.重组AlfB活性分析结果表明,该酶对2'-岩藻糖基乳糖(2'-focusllactose,2'-FL)亲和能力较强,在以对硝基苯-α-L-岩藻吡喃糖苷和乳糖为底物的情况下,可通过转糖基作用合成2'-FL及其异构体3'-FL.以上结果为进一步明确Alf B的催化活性及机制奠定了基础.
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关键词
α-L-岩藻糖苷酶2’-岩藻糖基乳糖异源表达转糖基作用水解活性α-L-fucosidase2'-fucosyllactoseheterologous expressiontransglycosylationhydrolytic activity
分类号
Q814（酶工程）
栏目名称
DOI
10.7506/spkx1002-6630-20241111-076
发布时间
2025-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（32272291）
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