换一批基于双荧光素酶报告基因的抗炎活性益生菌靶向筛选方法的建立与验证
Development and Validation of a Targeted Screening Method for Anti-inflammatory Probiotics Based on a Dual-Luciferase Reporter System
摘要为快速筛选获得具有抗炎活性的益生菌,构建一种双荧光素酶报告基因系统筛选方法.将含有核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)响应元件的双荧光素酶质粒转染至293T细胞,通过优化转染条件以及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导浓度等条件,建立筛选系统.采用该系统对筛选得到的86 株菌株抗炎活性进行评价,同时采用巨噬细胞RAW264.7炎症模型进行对比.结果表明,最佳转染条件为:pNF-κB-luc质粒与pRL-TK质粒比50∶1、质粒与转染试剂比1∶1、转染时间24 h、LPS诱导质量浓度100 ng/mL.对比结果显示,本实验建立的双荧光素酶报告系统具有可靠性(Z'=0.663 2)与稳定性(R2=0.746 99),菌株筛选结果与RAW264.7炎症模型筛选结果一致.通过本方法最终获得植物乳植杆菌X30、发酵粘液乳杆菌X58与融合魏斯氏菌X83共3 株具有良好抗炎活性的菌株,可有效抑制NF-κB通路的激活,显著降低白细胞介素(interleukin,IL)-1β、肿瘤坏死因子-α、NF-κB p65炎症因子的表达,提高IL-10的表达.本系统为靶向筛选具有抗炎活性的益生菌提供了新思路.
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关键词
抗炎活性靶向筛选双荧光素酶报告基因核因子-κBanti-inflammatory activitytargeted screeningdual-luciferase reporter genenuclear factor-kappa B
分类号
TS201.3
栏目名称
DOI
10.7506/spkx1002-6630-20250118-138
发布时间
2025-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点研发计划（2022YFD2100702）
国家自然科学基金（32025029）
国家乳业技术创新中心关键技术攻关项目（2024-JSGG-018）
国家自然科学基金（U23A20261）
上海食品微生物工程技术研究中心项目（19DZ2281100）
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