卢氏发光杆菌κ-卡拉胶酶Cgk483的重组表达及其酶解产物的体外降脂功能
Recombinant Expression of κ-Carrageenase Cgk483 from Photobacterium rosenbergii and in Vitro Lipid-Lowering Activity of κ-Carrageenan Oligosaccharides Prepared Using It
摘要本研究旨在探讨卢氏发光杆菌(Photobacterium rosenbergii)中κ-卡拉胶酶Cgk483的重组表达及其在卡拉胶寡糖制备中的应用,并对得到的卡拉胶寡糖进行结构表征以及体外降脂效果分析.通过基因克隆和异源表达,成功获得电泳纯的重组酶Cgk483,其分子质量为35.89 kDa,纯化后的酶活力提升10倍,达到489.88 U/mg.酶学性质研究表明,重组酶Cgk483的最适反应温度和pH值分别为40℃和8.0,在40℃以下和pH 5.0~10.0范围内具有较好稳定性,Fe2+、Na+和Ba2+能提升重组酶Cgk483的活性.利用重组酶Cgk483成功制备得到κ-卡拉胶寡糖,由新卡拉二糖、新卡拉四糖和新卡拉六糖组成.结构分析显示酶解未破坏其主链,但使其羟基等基团暴露,提高了κ-卡拉胶寡糖的溶解性.体外降脂研究表明,κ-卡拉胶寡糖能显著抑制氧化型低密度脂蛋白引起的RAW264.7巨噬细胞泡沫化,减少脂质蓄积.本研究制备了高效制备κ-卡拉胶寡糖的工具酶,并揭示了其酶解产物在降脂方面的应用潜力,可为κ-卡拉胶寡糖的高效制备及动脉粥样硬化防治拓展新思路.
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