基于UPLC-QTOF-MS技术的母乳非靶向代谢组学分析方法的建立与优化
Establishment and Optimization of an Untargeted Metabolomics Method for the Analysis of Breast Milk Based on Ultra-high Performance Liquid Chromatography Quadrupole Time-of-Flight Mass Spectrometry
摘要基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱平台,建立一种适用于不同泌乳阶段母乳样本的非靶向代谢组学分析方法.该方法结合蛋白沉淀和样本浓缩,并优化复溶液组成,以提升代谢物提取效率和检测灵敏度.采用反相色谱(T3柱)与亲水作用液相色谱(HILIC柱)联合策略,兼顾极性与非极性代谢物的分离效果,以提升代谢物覆盖范围.在方法评估中,系统比较了蛋白沉淀法、单相提取法与双相提取法在代谢物数量、化学分类、脂质与非脂质物质的识别能力以及3 种方法的差异.结果表明,蛋白沉淀结合浓缩处理简单高效,适用于高通量分析,且在代谢物覆盖率方面整体优于其他两种方法.但在具体应用中仍需根据研究目的合理选择前处理方案.色谱比较结果显示,T3柱和HILIC柱各有优势,两者联合可显著提升代谢物种类与结构多样性,T3柱单独检出的代谢物占78.16%,HILIC柱占21.84%,仅有7.32%的代谢物在两者上均被检测到,显示两种色谱柱具有良好的互补性.
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