换一批添加扩增内标的单增李斯特菌PCR检测方法的建立与应用
Development and application of a PCR method with an internal amplification for detection of Listeria monocytogenes
摘要以单增李斯特菌inlA基因为靶基因,设计一对特异性引物,以16S rRNA为扩增内标对照,建立了一种含有扩增内标的单增李斯特菌PCR检测方法.优化了PCR反应体系,并对PCR检测方法的特异性、灵敏度、人工污染样品及食品样品检测效果进行了测试.对2株单增李斯特菌、1株英诺克李斯特菌以及19株非李斯特菌菌株进行PCR检测,结果显示,只有2株单增李斯特菌能被检出大小为826 bp的特异性片段,其余20株细菌只能检出1 500 bp的扩增内标片段.灵敏度实验结果显示,基因组DNA和纯培养物的最低检出限分别为1.80×102 fg/μL和1.21×102 CFU/mL.当人工污染牛乳样品中单增李斯特菌在最低接种量为0.48 CFU/mL时,经8h增菌培养后可被该方法检出.采用该研究建立的检测方法对36种食品样品进行检测,证实了该检测方法可以指示检测过程中出现的假阴性现象.综上所述,该研究建立的PCR检测方法能特异性的检测单增李斯特菌,并可有效排除检测过程中出现的假阴性现象,提高检测的准确性.
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关键词
单增李斯特菌聚合酶链式反应检测方法扩增内标内化素基因Listeria monocytogenespolymerase chain reactiondetection methodinternal amplification controlinlA
栏目名称
DOI
10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201609033
发布时间
2016-10-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家科技支撑计划（2012BAD29B06）
中国博士后科学基金（2015M582803）
国家重点实验室开放基金（SKLPBS1520）
辽宁省重点实验室开放基金（LNSAKF2013018）
辽宁省高等学校创新团队项目（LT2014024）
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