换一批
换一批摘要为了研究重组谷氨酰胺转胺酶突变体(microbial transglutaminase mutant,MTG-MUT2)的分离纯化、糖基化和催化应用,将毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115用于高密度发酵表达MTG-MUT2.首先,通过毕赤酵母高密度发酵获得粗酶液,组氨酸标记亲和层析法分离纯化得到高纯度的MTG-MUT2,酶活力为12.3 U/mL.与粗酶比较,蛋白纯化2.7倍,回收率为87.4％.接着,采取分子筛分离MTG-MUT2的3种不同成分,研究糖基化对酶活性的影响.研究发现MTG-MUT2的酶活性主要由其糖基化蛋白决定,N282位点的糖基化对酶的活性起很大作用.最后,将该酶用于L-赖氨酸(660 mmol/L)和L-谷氨酰胺(600 mmol/L)的催化反应,反应产物(谷氨酰胺二肽)的拉曼散射光谱的特征峰比野生酶高20％.结果表明MTG-MUT2具有比野生酶更高的热稳定性和催化效率.
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