利用重组酶高效转化制备稀有人参皂苷C-Mc1和C-Mc
Preparation of rare ginsenoside C-Mc1 and C-Mc by recombinant ginsenosidase
摘要为了高效制备稀有人参皂苷C-Mc和CMc1,调取了Terrabacter ginsenosidimutans中的人参皂苷酶基因,构建载体GST-bgpA,并转化到Escherichia coli C41(DE3)中表达,得到人参皂苷3-O-β-D-葡萄糖苷酶.该酶分子质量为72.4 kDa,转化人参皂苷Rc的最适pH为7.0,最适温度为40℃,米氏常数Km值为6.25 mmol/L,Vm值为19.6 mmol/(h·L).为了降低成本,利用粗酶转化人参皂苷Rc制备C-Mc1和C-Mc.粗酶制备C-Mc1的反应条件:20 g/L的人参皂苷Rc在40℃下酶反应24 h;制备C-Mc的反应条件:5 g/L的人参皂苷Rc在40℃下酶反应60 h.此条件下,粗酶转化制备并分离纯化得到C-Mc1和C-Mc的单体,并经HPLC检测,其纯度均在90%以上.C-Mc1的酶转化制备:产物得到C-Mc和C-Mc1,其摩尔得率分别为74.9%和11.1%.C-Mc的酶转化制备:C-Mc的摩尔得率为93.2%.该研究为稀有人参皂苷C-Mc和C-Mc1产业化提供了依据.
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