高产β-葡聚糖酶里氏木霉的诱变选育、酶学性质及体外模拟消化研究
Mutation breeding,enzymatic properties,and in vitro digestibility of Trichoderma reesei with high yield of β-glucanase
摘要β-葡聚糖酶可水解大麦等谷物中的葡聚糖,降低葡聚糖在单胃动物消化道内产生的抗营养作用.为获得高产 β-葡聚糖酶菌株,采用常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)诱变里氏木霉(Trichoderma reesei),经初筛、复筛、遗传稳定性及酶学特性表征,突变株 ARTP-9 较出发菌株 β-葡聚糖酶活力提高 54.38%,为 43.75 U/mL,产酶能力稳定遗传,酶的最适反应温度及 pH 分别为 50℃和 6.0,耐受温度为 40~80℃,pH 2.5~6.5 时酶活力稳定,Fe2+、Mg2+对酶活力有促进作用,Fe3+、Mn2+、Zn2+、Ca2+、Cu2+对酶活力有抑制作用.以 β-葡聚糖为底物,该粗酶的Km 值和Vmax值分别为 1.59 mg/mL和 6.99 μmol/(mg·min).体外模拟消化实验表明,ARTP-9 固态发酵酶制剂在胃期 4h黏度最低,为 2.23 mPa·s;肠期 21h还原糖为 0.70 mg/mL,是空白的 3.2 倍,差异显著(P<0.05),其大麦粉体外消化率为 48.17%,较空白提升 9.02%,差异极显著(P<0.01).研究结果表明 ARTP诱变技术能够显著提高里氏木霉 β-葡聚糖酶活力,为其工业化生产奠定基础.
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