换一批分子改造羰基还原酶CpCR提高其催化合成2-苯乙醇能力
Molecular modification of carbonyl reductase CpCR to improve its ability to catalyze the synthesis of 2-phenylethanol
摘要该研究对近平滑假丝酵母ATCC 7330羰基还原酶CpCR进行分子改造,以提高其催化合成2-苯乙醇的能力.通过易错PCR构建突变文库,利用2,4-二硝基苯肼高通量筛选阳性突变株,测序确定氨基酸突变位点.再通过蛋白质半理性设计进行虚拟饱和突变,采用定点突变技术进行构建和评价.筛选获得突变体T171F具有更强的催化能力和热稳定性.进一步考察了催化时间、温度、pH值和底物浓度对wtCpCR和T171F催化合成2-苯乙醇的影响.研究表明,酶最适催化合成2-苯乙醇的温度为30℃;T171F最适催化合成2-苯乙醇的pH为6.5;苯乙醛的质量浓度为1 000 mg/L时T171F产率可达91.24％,是wtCpCR的2.8倍.此外,突变体T171F相比wtCpCR催化时间由10 h降低到4 h,催化效率得到很大的提高.该研究为羰基还原酶催化合成2-苯乙醇提供科学基础,同时具有一定的应用价值.
更多相关知识
关键词
羰基还原酶易错PCR2,4-二硝基苯肼半理性设计2-苯乙醇carbonyl reductaseerror-prone PCR2,4-Dinitrophenylhydrazinesemi-rational design2-phenylethanol
栏目名称
DOI
10.13995/j.cnki.11-1802/ts.034383
发布时间
2023-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
- 浏览2
- 被引0
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
