换一批KlacPNP基因密码子优化及在枯草芽胞杆菌中的高效表达
Codon optimization and efficient expression of KlacPNP gene in Bacillus subtilis
摘要嘌呤核苷磷酸化酶(purine nucleoside phosphorylase,PNP)是嘌呤补救合成途径中的关键酶,嘌呤降解途径涉及氧化嘌呤环裂解,在人体中形成尿酸作为最终产物,增加患痛风的风险.为提高PNP的发酵水平,将来源于乳酸克鲁维酵母的PNP基因进行密码子优化,分别将优化前后的 目的PNP基因连接至分泌表达载体pB-SA43,并在枯草芽胞杆菌WB600中重组表达PNP-YP-pBSA43、PNP-YO-pBSA43.结果显示,密码子优化前的酶活力为333.69 U/mL,优化后的酶活力达到351.61 U/mL.为进一步提高重组蛋白表达量,通过响应面分析得出优化后重组菌株产PNP的最佳发酵条件为初始pH为6.67、发酵时间55 h、发酵温度28.7℃.在该条件下,重组PNP活力为372.79 U/mL,相比未优化前提高了 12％.来源于乳酸克鲁维酵母的PNP基因经密码子优化后重组表达,酶活力显著提高,对PNP在枯草芽胞杆菌中高效表达奠定了基础.
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关键词
嘌呤核苷磷酸化酶枯草芽胞杆菌密码子优化异源表达响应面分析purine nucleoside phosphorylaseBacillus subtiliscodon optimizationheterologous expressionresponse surface analysis
栏目名称
DOI
10.13995/j.cnki.11-1802/ts.034596
发布时间
2023-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
中国博士后科学基金（2019M651149）
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