换一批一株热反硝化地芽孢杆菌Y62产耐高温α-淀粉酶的异源表达
Heterologous Expression of a Thermostable α-Amylase Produced by Geobacillus thermodenitrificans Y62
摘要为获得耐高温α-淀粉酶的菌株,该研究从常年覆盖热油的土壤中分离筛选产耐高温淀粉酶的细菌,通过形态学、生理生化分析和16S rRNA鉴定菌株种属,对筛选出的菌株进行中试工程化发酵产酶,下游酶分离中利用简便的硫酸铵沉淀法分离粗酶,并且对分离纯化的耐高温淀粉酶提取物进行热稳定评价.克隆菌株耐高温淀粉酶的基因序列并用于构建表达载体,在大肠杆菌BL21中成功进行异源表达,并对所产淀粉酶进行生物信息学分析.结果表明:通过筛选获得一株产淀粉酶的热反硝化地芽孢杆菌(Geobacillus thermodenitrificans)Y62,中试放大后在48 h取得112.7 U/mL酶活,其粗酶回收率可达90.2％.该淀粉酶具有良好的耐高温特性,在100℃下仍能保持37.8％的活性.异源表达产物以包涵体的形式存在,改变诱导条件后溶出可溶性蛋白,纯化产物经过质谱鉴定后确定该淀粉酶为α-淀粉酶.生物信息学分析及预测表明该耐高温淀粉酶编码511个氨基酸,分子量为59.86 kDa,含2个跨膜区域、3个催化位点和2个Ca2+结合位点,与已报道的α-淀粉酶GTA相似.
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栏目名称
DOI
10.12161/j.issn.1005-6521.2023.10.026
发布时间
2023-06-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广东省重点领域研发计划项目（2020B0202010001）
泰山产业领军人才工程专项（tscy202006017）
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