非特异性过氧合酶发酵优化及在H2O2检测中的应用
Optimization of Unspecific Peroxygenase Fermentation and Its Application in the Detection of H2O2
摘要非特异性过氧合酶(unspecific peroxygenase,UPO)能够利用过氧化氢(H2O2)催化多种氧化反应,在工业中具有很大的应用潜力.针对Aae UPO在毕赤酵母中表达量低以及发酵工艺不清的问题,通过摇瓶发酵优化以及正交试验确定发酵培养基条件,并进一步通过 5L发酵罐进行放大.结果表明,毕赤酵母摇瓶水平高效表达Aae UPO的基本发酵条件:甲醇浓度1.00%、培养基初始pH5.5、蛋白胨浓度 1.5%、酵母粉浓度1.5%,最优发酵条件下粗酶液酶活达到18.2 U/mL.在摇瓶水平发酵试验的基础上进行5L发酵罐放大试验,优化后以接种量 10%、诱导温度 30℃、流加甲醇作为最终工艺条件.最终得到的细胞湿重 244 g/L,最高酶活为 25.1 U/mL,相较于初期未优化酶活提升了 91.6%.将Aae UPO用于H2O2 检测,Aae UPO对于H2O2 具有较好的检测性能,检测限达到5 μmol/L,抗干扰性能强.
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