换一批CRISPR-Cas12a检测牛奶中大肠杆菌方法的建立与评价
Establishment and Evaluation of CRISPR-Cas12a Method for Detecting Escherichia coli in Milk
摘要为提高牛奶中大肠杆菌的检测效率,简化分析流程,该文建立基于成簇的规则间隔短回文重复序列(clus-tered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)的牛奶中大肠杆菌快速检测体系.首先,构建CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated protein,CRISPR-Cas),CRISPR-Cas12a的重组表达质粒,并将其转化至BL21感受态细胞,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(lsopropyl β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达Cas12a蛋白.然后,通过麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein,MBP)亲和层析、凝胶过滤层析等方法将Cas12a蛋白进行纯化.最后,设计靶向大肠杆菌16S rDNA目的片段的特异性CRISPR RNA(crRNA),将特异性的crRNA、大肠杆菌 16S rDNA的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)胶纯化产物和纯化的Cas12a蛋白进行混合,建立CRISPR-Cas12a靶向切割体系.验证结果显示该体系可用于检测牛奶样品中的大肠杆菌.
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DOI
10.12161/j.issn.1005-6521.2023.18.024
发布时间
2023-09-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
广东省基础与应用基础研究基金自然科学基金面上项目（2022A1515012602）
广东省教育厅普通高校青年创新人才项目（2019KQNCX150）
惠州学院教学质量工程建设项目（X-ZLGC2021009）
国家级大学生创新创业训练计划项目（S202210577039）
广东省普通高校特色创新项目（2020KTSCX313）
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