摘要以液压压榨澳洲坚果粕为原料,采用碱性蛋白酶水解制备澳洲坚果多肽(macadamia nut peptide-0,MNP-0),以对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌活性为跟踪指标,通过超滤、DA201-C型大孔吸附树脂、交联葡聚糖凝胶Sephadex G-25 对其进行逐级分离纯化,获得抑菌活性较强的抗菌肽,并运用液相色谱串联质谱(liquid chromatogra-phy tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)技术对其进行肽段组成与氨基酸序列分析.结果表明:超滤分离的不同分子量澳洲坚果多肽在所有多肽中所占质量分数不同,抑菌活性也有所差异.其中,澳洲坚果多肽组分MNP-4 占比最高,为 29.55%;抑菌活性也最强,对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌圈直径分别为 10.01 mm与 9.41 mm.大孔吸附树脂纯化多肽组分MNP-4 的技术条件为 75%乙醇溶液为解吸剂,静态吸附 3h,动态洗脱体积 60 mL.经大孔吸附树脂与交联葡聚糖凝胶Sephadex G-25 分离纯化,获得 3 个澳洲坚果纯化多肽(macadamia nut purified peptide,MPP)组分,其中组分MPP-2 的抑菌活性最强,对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌的抑菌圈直径分别为 18.67 mm与16.83 mm,优于多肽MNP-0与超滤分离多肽组分.分离纯化的澳洲坚果抗菌活性多肽MPP-2含有DDLTDPAPA、VLL、WDY、VPV、WDL、LLW、LWL、FDW 8 个肽段,经预测分析,属于抗菌肽的肽段为WDL与FDW,其概率得分a(1.00≥a≥0.50)均为 1.00,疏水率均为 66.67%,均带有 1 个负电荷,等电点分别为 0.69 与 0.67,并具有较好的溶解性.研究结果表明澳洲坚果可通过酶法制备具有抗菌活性的肽类成分.