酶联核酸适配体比色法检测奶粉中的乳铁蛋白
Detection of Lactoferrin in Milk Powder by Enzyme-linked Nucleic Acid Aptamer Colorimetric Method
摘要建立一种酶联核酸适配体间接竞争型比色法检测奶粉中的乳铁蛋白(lactoferrin,Lf).生物素化Lf适配体通过链霉亲和素-生物素作用与辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)缀合形成检测探针,与样品溶液混合孵育后加入 96 孔微孔板,样品中的Lf与提前包被在微孔板内的Lf共同竞争结合检测探针,洗涤后结合微孔板内Lf的检测探针中HRP高效催化底物 3,3',5,5'-四甲基联苯胺显色,进而间接实现样品中Lf的定性定量检测.在磷酸缓冲盐溶液及基质体系中,Lf浓度在 50~300 nmol/L内均表现出良好的线性关系,相关系数(R2)分别为 0.993 3、0.996 7,特异性较好,检出限为 24.45 nmol/L,加标回收率 91.3%~115.4%.采用该方法对 3 种市售奶粉开展Lf检测,并使用高效毛细管电泳法进行验证,一致率为 94.39%~109.50%.该方法操作简单,成本较低,灵敏度较好,有望实现奶粉中Lf商业化检测.
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