换一批
换一批草鱼血清IgM蛋白的纯化及抗血清的制备
PURIFICATION OF SERUM IGM FROM GRASS CARP (CIENOYHARYNGODONI DELLUS) AND PREPARATION OF RABBIT SERA ANTI-IGM DING
摘要采用盐析法、重组蛋白A(HiTrap rProteinA Sepharose)亲和层析法分离纯化草鱼血清中的IgM,并通过SDS-PAGE及Western-blot技术对纯化蛋白的部分特性进行分析比较并制备兔抗IgM抗血清.结果表明:33%硫酸铵溶液可以沉淀血清中大部分蛋白,但电泳条带仍较多,其中含有78 kD和28 kD的条带,因此仅可作为免疫球蛋白粗提的方法;而rProteinA亲和层析法所提蛋白则仅有上述重链(78 kD)和轻链(28 kD).Western-blot显示,鼠抗人Ig抗体可与78 kD及28 kD条带发生发应.rProteinA亲和法提纯蛋白的纯度较高,但含量较低.条带较淡,仅可作为实验室小量提纯草鱼IgM的有效方法.将提纯的蛋白免疫实验兔后可制得效价高达1:25600的兔抗鱼IgM血清,并测得血清蛋白总量和IgM含量分别为25.87 mg和4.5 mg,IgM占血清蛋白总量的17.39%.本实验所采用的蛋白A亲和层析法提取草鱼血清IgM可以方便、快捷地获得高纯度的产物,适合在实验室中纯化鱼类lgM.同时本研究所制备的兔抗草鱼IgM血清也为今后的相关研究工作打下基础.
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关键词
草鱼蛋白A亲和层析法免疫球蛋白兔抗鱼IgM血清酶联免疫吸附分析Grass crapProtein A-sepharose affinity chromatographyImmunoglobulin M(IgM)Rabbit sera anti-IgMELISA
分类号
Q816
DOI
10.3724/SP.J.1035.2010.00164
发布时间
2010-05-26
基金项目
国家自然科学基金（30471343）；
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(中国水产科学研究院淡水渔业研究中心)项目（2007JBFC07;2009JBFC01）；
中国水产科学研究院热带亚热带鱼类选育与养殖重点开放实验室开放课题（2008-Y-004）
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