换一批
换一批赤点石斑鱼促甲状腺激素TSHβ启动子的克隆及其在斑马鱼胚胎原始性腺和垂体中定位表达
CLONING OF RED-SPOTTED GROUPER TSHβ PROMOTER AND ITS LOCALIZATION EXPRESSION IN PRIMITIVE GONAD AND PITUITARY OF ZEBRAFISH EMBRYOS
摘要促甲状腺激素(Thyroid-stimulating hormone,TSH)具有调节生长,发育,代谢和生殖的功能,但是在低等脊椎动物中的功能研究较少.斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)促甲状腺激素TSHβ除在垂体中表达外还在性腺中表达,进一步发现TSHβ也在赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)性腺中表达.且在人工诱导的赤点石斑鱼中,随着雄性化的转变,TSHβ转录水平升高.为研究石斑鱼TSHβ特殊表达方式的调控机制,采用基因组步移技术扩增获得赤点石斑鱼TSHβ5'端序列共5112 bp.将1864 bp核心片段顺向克降到pBK-TOL2载体中,pTSH[5.TOL2重组质粒与转座酶mRNA共注射斑马鱼-细胞期受精卵.Western blot结果显示,在受精后10h的尾芽胚中町检测到GFP的表达,胚体晚期GFP表达量最高.荧光显微镜追踪观察发现,受精后12-30hpf(Hours post fertilization)观察到GFP在原始生殖细胞(PGC)区域表达;36hpf-7dpf观察到GFP除在PGC区域表达外还在垂体中表达.由此可见,赤点石斑鱼TSHβ 5'端1864 bp的序列具有特异定位的启动子活性.
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