换一批
换一批凡纳滨对虾溶菌酶基因在毕赤酵母中的分泌表达和活性检测
SECRETED EXPRESSION OF LITOPENAEUS VANNAMEI LYSOZYME GENE IN PICHIA PASTORIS AND ITS BIOACTIVITY DETECTION
摘要原核重组表达的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)溶菌酶蛋白主要以包涵体形式存在,经变性和复性处理后活性仍较差.研究将凡纳滨对虾溶菌酶基因(Lvlyz 基因)克隆至毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,电击转化毕赤酵母 GS115 细胞,经组氨酸营养缺陷培养基筛选和PCR检测获得转化子.对其进行连续甲醇诱导表达,利用SDS-PAGE和C端携带的6 × His标签,对发酵液上清进行Western blot检测,结果表明19.3 kD左右的条带即是重组表达的溶菌酶蛋白.用溶壁微球菌平板抑菌法鉴定表达产物具有较强的抑菌能力.研究首次利用毕赤酵母真核表达系统实现对虾溶菌酶基因的可溶性表达,并且表达产物的活性良好.
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