换一批小球藻细胞壁缺陷型突变体的筛选及转化系统的建立
SCREENING OF CELL WALL-DEFECTIVE MUTANTS AND CONSTRUCTION OF TRANSFORMATION SYSTEM IN CHLORELLA VULGARIS
摘要由于高效、稳定遗传转化系统的缺乏,小球藻遗传改良以及油脂代谢机理的研究等工作难以进行.研究旨在通过筛选获得小球藻Chlorella vulgaris细胞壁缺陷型突变体,在此基础上建立其转化系统.首先通过紫外诱变获得小球藻Chlorella vulgaris的突变体库,基于细胞壁缺陷型突变体在1％ Triton X-100处理后叶绿素会释放到上清中的原理,利用酶标仪高通量地从约4000个突变体中筛选获得10株细胞壁缺陷的小球藻.同时以小球藻内源性β-tubulin的启动子和终止子作为启动子和终止子,以AphⅧ(Aminoglycoside 3'-Phosphotransferase typeⅧ)作为报告基因构建了转化载体pHK203.通过优化电转缓冲液组分和电击参数,确定了细胞壁缺陷型突变体CWD-3的最佳转化条件,即2μg pHK203,ddH2O作为电转缓冲液,1500 V,525 Q,50 μF的电击条件下,转化效率可达到40个转化子/μg DNA.研究为小球藻Chlorella vulgaris的油脂代谢通路和遗传改良提供了技术基础,同时由于可降低破壁成本,筛选获得的细胞壁缺陷型突变体适于工业化生产小球藻藻粉.
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