免疫刺激诱导草鱼肿瘤坏死因子TNF-α的体外表达特征研究

IN VITRO EXPRESSION PATTERN OF GRASS CARP TUMOR NECROSIS FACTOR (TNF-α) IN RESPONSE TO IMMUNE STIMULATION

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摘要为了阐明免疫刺激诱导草鱼肿瘤坏死因子TNF-α的体外表达特征,克隆了草鱼TNF-α的cDNA,构建了原核表达载体pET-32-TNF-α,并在大肠杆菌DH5α中表达了His6-TNF-α.利用亲和层析镍柱纯化表达重组蛋白后将其作为免疫原免疫小鼠制备了抗草鱼TNF-α多克隆抗体.免疫印迹实验显示,制备的抗体能特异性识别细胞内源性TNF-α.在此基础上,分别研究了GCRV(草鱼呼肠孤病毒)感染、免疫刺激物Poly(I∶C)及LPS处理下不同时间点草鱼肾细胞CIK中TNF-α的表达情况,结果表明,TNF-α在草鱼肾细胞内翻译水平的表达量基本保持稳定.研究显示经典的TNF信号通路激活因子不能引起CIK细胞内TNF-α蛋白水平的显著变化.

作者卢翠玉 ^[1] 李炎 ^[2] 刘庆慧 ^[3] 吕利群 ^[2] 学术成果认领

作者单位上海海洋大学水产与生命学院,农业部淡水种质资源重点实验室,上海201306;中国水产科学研究院黄海水产研究所,青岛266071 ^[1] 上海海洋大学水产与生命学院,农业部淡水种质资源重点实验室,上海201306 ^[2] 中国水产科学研究院黄海水产研究所,青岛,266071 ^[3]

关键词草鱼呼肠孤病毒肿瘤坏死因子TNF-α 原核表达多克隆抗体 Grass carp reovirus Tumor necrosis factor (TNF alpha)Prokaryotic expression Polyclonal antibody

主题词鲤鱼类(Carps)肿瘤(Neoplasms)坏死(Necrosis)免疫法(Immunization)研究(Research)

分类号 S941.4

DOI 10.7541/2016.64

发布时间 2016-11-28

基金项目

现代农业产业技术体系建设专项资金 国家自然科学基金(31372561)资助[Supported by the Earmarked Fund for China Agriculture Research System the National Natural Science Foundation of China (No.31372561)]