三疣梭子蟹PtToll-1受体的原核表达及组织、细胞分布研究

PROKARYOTIC EXPRESSION OF THE TOLL RECEPTOR PTTOLL-1 AND ITS CELLULAR DISTRIBUTION IN PORTUNUS TRITUBERCULATUS

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摘要为深入研究三疣梭子蟹Toll受体的功能,在前期工作的基础上构建了PtToll-1胞外结构域原核表达载体,并成功获得其重组蛋白.将获得的重组蛋白免疫小鼠获得抗此重组蛋白免疫抗血清用于后续研究.SDS-PAGE结果表明,体外诱导表达重组蛋白rPt Toll-1以包涵体的形式出现在大肠杆菌裂解液的沉淀中,分子量大小约为87.18 kD;Western-Blot分析表明,小鼠抗血清能与rPt Toll-1特异性结合.利用免疫荧光及细胞免疫化学方法对三疣梭子蟹PtToll-1在消化道、肝胰腺、鳃、心脏和肌肉等组织及血淋巴细胞中的分布进行研究.此外成功构建PtToll-1完整蛋白的真核表达载体pEGFP-N2-Pt Toll-1,并转染HEK293T细胞研究其在哺乳动物细胞HEK293中的表达.组织免疫荧光结果显示,Pt Toll-1在三疣梭子蟹消化道、肝胰腺、鳃、心脏及肌肉等组织中均有分布,但在鳃及消化道的组织结构中表达较强;细胞免疫荧光及免疫化学结果均表明Pt Toll-1主要分布在血淋巴的细胞膜上;激光共聚焦显微技术观察发现,pEGFP-PtToll-1融合蛋白也主要在HEK-293T细胞膜上表达.研究结果将为三疣梭子蟹Toll受体蛋白的免疫学功能的研究奠定基础.

作者张丹枫 ^[1] 王国良 ^[1] 杨宁 ^[2] 张鑫 ^[1] 周素明 ^[1] 刘顺 ^[1] 学术成果认领

作者单位宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室,宁波,315211 ^[1] 宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室, 宁波 315211;青岛农业大学海洋科学与工程学院, 青岛 266109 ^[2]

关键词三疣梭子蟹 Toll受体胞外结构域原核表达组织分布真核表达细胞定位 Portunus trituberculatus Toll receptor Ectodomain Prokaryotic expression Tissue distribution Eukaryotic expression Cell localization

主题词疣(Warts)细胞(Cells)研究(Research)组织(Tissues)蛋白(Egg White)

分类号 Q344+.1

DOI 10.7541/2018.038

发布时间 2018-05-11

基金项目

国家自然科学基金 浙江省自然科学基金 宁波市科技计划项目 宁波大学"水产"浙江省重中之重开放基金 浙江省大学生科技创新活动计划暨新苗人才计划(2016R405043)资助[Supported by the National Natural Science Foundation of China Natural Science Foundation of Zhejiang Province Ningbo Science and Technology Project the Open Fund of Zhejiang Provincial Top Key Discipline of Aquaculture of Ningbo University College Students'Science and Technology Innovation Activities Project Plan(New Talent Plan)in Zhejiang Province(2016R405043)]