二化螟APN1的原核表达及其与Cry2Aa蛋白的结合特性研究

Prokaryotic expression of aminopeptidase N1 from Chilo suppressalis and in vitro binding analysis with the Cry2Aa toxin

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摘要[目的]Bt杀虫蛋白发挥杀虫活性的重要前提是Cry蛋白能够与昆虫中肠上皮细胞刷状缘膜囊(BBMVs)上的受体蛋白结合.在前期获得二化螟氨肽酶N1(Aminopeptidase N,APN1)基因全长序列的基础上,明确二化螟APN1多肽片段与Cry2Aa的结合能力.[方法]将二化螟APN1序列片段在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,利用蛋白质单向电泳和ligand blotting技术分析二化螟APN1多肽片段与Cry2Aa的结合能力.[结果]重组载体可在表达菌株BL21(DE3)中表达一个约70 ku的蛋白,纯化后的多肽条带单一,纯度较好.Ligand blot分析结果显示,表达的二化螟APN1多肽片段可以与活化的Cry2Aa杀虫蛋白结合,且结合条带随着重组蛋白上样量的降低而减弱.[结论]APN1多肽片段可以与Cry2Aa结合,为阐明APN1基因的功能奠定基础,也为其他Bt蛋白的受体蛋白相关研究提供新的借鉴.

作者刘慧 ^[1] 李博 ^[2] 牛林 ^[3] 邱林 ^[4] 王永 ^[5] 学术成果认领

作者单位湖北工程学院生命科学技术学院/特色果蔬质量安全控制湖北省重点实验,湖北孝感432000;华中农业大学植物科学技术学院/昆虫资源利用与害虫可持续治理湖北省重点实验室,湖北武汉430070 ^[1] 广州海关隶属南沙海关,广东广州,511400 ^[2] 中国农业科学院棉花研究所/棉花生物学国家重点实验室,河南安阳,455000 ^[3] 湖南农业大学植物保护学院,湖南长沙,410128 ^[4] 湖北工程学院生命科学技术学院/特色果蔬质量安全控制湖北省重点实验,湖北孝感,432000 ^[5]

关键词 Cry2Aa 二化螟 APN1 原核表达结合能力

主题词蛋白(Egg White)才能(Aptitude)研究(Research)基因(Genes)目的(Goals)

栏目名称 研究论文

DOI 10.3969/j.issn.2095-1787.2018.04.005

发布时间 2019-02-20

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