换一批棉铃虫细胞色素P450基因(CYP6AE17和CYP6AE19)原核表达及多克隆抗体制备
Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of cytochrome P450(CYP6AE17 and CYP6AE19)from Helicoverpa armigera
摘要[目的]通过克隆及表达棉铃虫 CYP6AE17 和 CYP6AE19 基因,制备鼠抗棉铃虫细胞色素 P450(CYP6AE17、CYP6AE19)多克隆抗体,为进一步研究细胞色素P450 酶在棉铃虫中的功能奠定基础,为棉铃虫的绿色防控提供理论依据.[方法]构建重组质粒pET32a-CYP6AE,诱导表达并纯化重组蛋白,将其作为抗原免疫小鼠,制备多克隆抗体,利用ELISA检测多克隆抗体的效价,通过Western blot检测多克隆抗体的特异性.[结果]CYP6AE17、CYP6AE19 基因CDS序列全长分别为 1 572 和 1 587 bp,分别编码 523 和 528 个氨基酸.SDS-PAGE分析结果表明,CYP6AE17 和 CYP6AE19 基因均可在大肠杆菌原核表达系统中高效诱导表达,重组蛋白主要以包涵体形式存在.ELISA 结果表明,制备的鼠抗棉铃虫CYP6AE17 和CYP6AE19 多克隆抗体效价分别达 1∶102 400 0 和 1∶512 000,且均可特异性识别棉铃虫体内的天然P450蛋白.[结论]该研究结果为进一步深入研究棉铃虫细胞色素P450 酶的功能奠定了材料基础,为棉铃虫防治新靶标的开发提供了理论依据.
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关键词
棉铃虫细胞色素P450基因克隆原核表达纯化多克隆抗体Helicoverpa armigeracytochrome P450gene cloningprokaryotic expression and purificationpolyclonal antibody
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.2095-1787.20240129
发布时间
2026-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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