换一批小鼠Dppa2基因shRNA载体的构建及干扰效果的检测
Construction and Evaluation of shRNA Recombinant Plasmids Targeting Mouse Dppa2 Gene
摘要目的:构建有效的针时小鼠Dppa2基因的shRNA(short hairpin RNA)干扰载体.方法:设计合成2对针对小鼠Dppa2基因的shRNA序列以及1对与哺乳动物基因组无同源性的shRNA序列作为对照,构建pSUPER.Retro.puro干扰载体并进行PCR,酶切和测序验证.进一步将各干扰栽体分别转染小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs),RT-PCR检测干扰效率.结果:PCR,酶切和测序验证均表明各shRNA栽体构建成功.将空载体及各重组栽体分别转染小鼠ESCs发现,干扰组Dppa2基因表达水平相对于空载体对照组和阴性shRNA载体对照组明显下调.结论:成功构建了有效的针对小鼠Dppa2基因的shRNA干扰载体,为进一步研究Dppa2基因在维持小鼠ESCs不分化过程中的作用提供了基础.
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