换一批
换一批Snai1 miRNA干扰质粒构建及胃癌细胞系稳定株筛选
Construction of Snai1 miRNA recombinant eukaryotic expression vectors and screening of stably transfected cell clone
摘要目的:设计并构建针对Snai1的微小干扰核糖核酸(miRNA),最终鉴定出有效干扰质粒并筛选稳定转染的胃癌细胞株SGrC-7901.方法:设计并构建4对Snai1的pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR microRNA及1对无效对照microRNA干扰质粒.将干扰质粒用罗氏BD转染试剂转染胃癌细胞株SGC-7901,通过倒置荧光显微镜观察绿色荧光确定转染效率.分别用不同浓度1的杀稻瘟菌素作用于SGC-7901细胞,得到杀稻瘟菌素对SGC-7901细胞的筛选浓度.Western blot检测4对干扰质粒、阴性对照质粒对snai1蛋白水平表达的影响.结果:测序表明,Snai1 干扰序列及读码框完全正确,干扰质粒瞬时转染的SGC-7901细胞系在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光达85%以上.杀稻瘟菌素对于SGC-7901细胞的筛选浓度为5μg/ml.Westernblot结果显示,干扰序列Mi-1对Snai1有较强的干扰效果.结论:成功构建了Snai1干扰真核表达载体,同时筛选出有效干扰质粒及稳定转染株,为进一步研究Snai1在胃癌中的作用奠定了基础.
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发布时间
2011-05-03
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