HistoGel预包埋法在微小组织石蜡切片中的应用

Application of HistoGel Pre-embedding for Preparing Paraffin Sections of Microtissue

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摘要目的:探讨微小组织HistoGel预包埋的石蜡切片制作方法和优势.方法:选择拟胚体(embryoid body, EB)为微小组织,将人类胚胎干细胞(human Embryonic Stem Cell,hESC)切割成小块,用拟胚体培养基在低贴附培养皿中悬浮培养形成拟胚体.收集拟胚体,4％的多聚甲醛固定.将HistoGel加热到60℃熔解,离心去除拟胚体中的固定液,把液态的HistoGel加到拟胚体上,调整拟胚体的相对位置使其相对集中,待胶冷却凝固,将含有拟胚体的胶块取出,进行常规的石蜡切片操作,包括脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色.显微镜下观察拟胚体的形态,并用拟胚体的形态完好度来评判这种方法.结果:HistoGel仅在60℃便可熔解,室温可以冷却凝固,含有拟胚体的胶块在整个操作过程中很方便.展片过程中,石蜡和HistoGel能够保持平整.HE染色的结果可以看出,拟胚体内部结构完好,细胞核和细胞质清晰可辨.结论:HistoGel可以作为一种微量细胞组织的预包埋胶制作石蜡切片,而且相比琼脂预包埋,HistoGel因其操作更加方便和特有的物理特性显示出更多的优点.