换一批
换一批基于CRISPR/Cas9技术构建CELF6基因敲除细胞系并探讨CELF6与p53基因的关系
Construction of CELF6 Knockout Cell Line Based on CRISPR / Cas9 Technique and Investigation of the Relationship between CELF6 and p53 Gene
摘要目的:构建CELF6基因敲除细胞系并探讨CELF6与p53基因之间的关系.方法:CRISPR/Cas9双载体慢病毒系统通过两个慢病毒载体分别向细胞中导入Cas9蛋白和sgRNA序列表达框,从而实现对CELF6基因的敲除.通过Surveyor(错配酶法)检测sgRNA活性并利用Western blot(蛋白质免疫印迹)检测CELF6的敲除效率.进一步利用CCK-8试剂盒检测敲除CELF6和过表达CELF6对细胞增殖的影响.利用公开可用的癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析CELF6在多种肿瘤组织中的表达情况.结果:CELF6基因敲除的HCT116细胞系成功构建.Western blot检测发现CELF6基因敲除的细胞系中p53、p-RB蛋白的表达水平显著下调,而CELF6过表达的细胞中p53、p-RB蛋白的表达水平明显上调.CCK-8实验结果显示敲除CELF6基因后,细胞增殖活性显著增强;而过表达CELF6后,细胞的增殖活性受到明显抑制.生物信息学分析发现CELF6在结肠癌、胶质母细胞瘤、子宫内膜癌、肾嫌色细胞癌、乳腺癌、甲状腺癌等肿瘤组织中显著低表达.结论:推测CELF6是一种新的潜在肿瘤抑制基因,其可能在肿瘤的发生、发展过程中发挥重要作用.
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