换一批
换一批FTO通过m6A调控3T3-L1细胞分化的作用及其机制研究
Effect and Mechanism of FTO in Regulating 3T3-L1 Cell Differentiation through m6A
摘要目的:探究m6A去甲基化酶FTO及其下游基因CLK2对3T3-L1细胞成脂分化的影响,以及FTO影响CLK2表达水平的分子机制.方法:(1)通过成脂分化诱导和后续的油红染色以及油红定量探究FTO和CLK2对3T3-L1细胞成脂分化的影响;(2)通过蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR测定FTO和CLK2蛋白水平和mRNA水平的改变;(3)通过生物信息学分析筛选不同分化时期的3T3-L1细胞差异化m6A修饰位点;(4)通过MeRIP-qPCR测定CLK2 mRNA上的m6A修饰水平;(5)通过放线菌素D抑制新生转录本合成探究CLK2 mRNA的降解速率;(6)通过胰岛素刺激探究3T3-L1细胞Insulin-AKT通路激活情况.结果:(1)3T3-L1细胞的成脂分化依赖FTO的去甲基化酶活性和CLK2的激酶活性;(2)CLK2 5'UTR区域存在可被FTO去甲基化的m6A修饰,且该位点m6A修饰提高CLK2 mRNA的降解速率;(3)CLK2表达水平与FTO表达水平存在正相关,且CLK2和FTO抑制剂均抑制3T3-L1细胞Insulin-AKT通路的激活.结论:FTO通过降低CLK2 5'UTR区域的m6A修饰水平从而抑制CLK2 mRNA的降解,促进CLK2的蛋白表达,CLK2进而通过维持Insulin-AKT通路活性促进3T3-L1细胞成脂分化.
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