换一批TaqMan-MGB探针法在MTHFR基因多态性检测中的应用研究
Research on the Application of TaqMan-MGB Probe Method in Detecting MTHFR Gene Polymorphisms
摘要目的:建立TaqMan-MGB探针法检测MTHFR基因C677T和A1298C多态性位点的方法.方法:基于MTHFR基因信息设计并优化了针对C677T和A1298C多态性位点的特异性引物和TaqMan-MGB探针,构建了实时荧光定量PCR检测体系.通过梯度稀释实验验证最低检测限,重复性实验评估检测一致性,并使用野生型与突变型质粒模板进行特异性验证.该方法应用于56例临床样本检测,并与传统Sanger测序结果对比分析,评估其准确性和实用性.结果:TaqMan-MGB探针法对C677T和A1298C位点的检测表现出高度特异性,野生型和突变型探针无交叉反应,能够准确区分基因型.敏感性实验显示,最低检出限分别为C677T 1.13× 103 copies/μL和A1298C 8.39× 101 copies/μL.重复性实验中,变异系数均低于1％,检测结果稳定可靠.在56例临床样本中,TaqMan-MGB法在C677T位点的总检出率为86.99％,A1298C位点的总检出率为97.92％.与Sanger测序结果对比,TaqMan-MGB法的一致性良好.结论:基于TaqMan-MGB法在检测MTHFR基因C677T和A1298C位点的多态性方面显示出高特异性、高灵敏度和优良的重复性,适合于临床大规模样本的快速检测.该方法为叶酸相关疾病的早期诊断和预防提供了一种有效的分子诊断工具.
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关键词
TaqMan-MGB探针MTHFR C677TMTHFR A1298C基因多态性TaqMan-MGB probeMTHFR C677TMTHFR A1298CGene polymorphism
栏目名称
DOI
10.13241/j.cnki.pmb.2025.16.004
发布时间
2025-10-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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