换一批t-PA突变体真核表达载体的构建及其在COS-7细胞的瞬时表达
The Construction of t-PA Variants Eukaryotic Expression Vector and Transient Expression in COS-7
摘要根据t-PA cDNA的全长序列,设计了扩增t-PA信号肽cDNA的引物,并进而获得了信号肽cDNA片段.将其回收纯化后,作为上游引物,结合原有的t-PA下游引物,分别以t-PA的缺失性原核表达载体pErA,以及后者的点突变体pErA(K)为模板,进行PCR反应,从而使二者各自增加了信号肽部分.进一步将其分别克隆至pcDNA3.0,构建了相应的真核表达载体pCSRA与pCSRK.酶切及测序结果均证明了构建的正确性.经LIPOFECTAMINE[TM]2000 Reagent将其分别转染至COS-7细胞,并同时设以pCDNA3.0为阴性对照.取转染后不同时间培养上清,以FAPA法进行检测.结果表明,上述构建载体的表达产物具有良好的溶圈活性.本实验为t-PA突变体在真核细胞的稳定表达奠定了基础.
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分类号
Q7（分子生物学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1671-8135.2003.04.016
发布时间
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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