换一批利用Red系统快速改构含鼠β-酪蛋白基因的细菌人工染色体
The Rapid Modification of a Bacterial Artificial Chromosome Containing Mouse β-casein Gene with Red System
摘要采用Red系统介导的同源重组方法对含有鼠β-酪蛋白基因的RPCI23-440C1 BAC进行快速改构.首先通过PCR方法,获得两端带有鼠β-酪蛋白基因同源序列的tPAm-Zeo同源重组片段,然后将此同源重组片段电击转化至已含有编码Red重组酶质粒的RPCI23-440C1 BAC菌中,在λRed重组系统的帮助下,通过同源重组片段两端与RPCI23-440C1中β-酪蛋白同源的序列在菌体内与β-酪蛋白基因发生同源重组,将其置换.最后利用Zeocin抗性基因两侧的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将抗性基因剔除.经Southern blot和序列分析鉴定表明,获得了重组正确且无编码两种重组酶质粒的tPAm-RPCI23-440C1 BAC克隆.
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医学主题词
基因(Genes)蛋白(Egg White)染色体, 人工, 细菌(Chromosomes, Artificial, Bacterial)小鼠(Mice)同源重组(Homologous Recombination)
分类号
Q81（生物工程学《生物技术》）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1671-8135.2005.08.009
发布时间
2005-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家高技术研究发展计划（863计划）（2002AA206621）
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