换一批
换一批摘要构建可经RU486诱导表达载体,并证实其对基因表达的调控作用.通过分子生物学技术,改造了含有GLP65反式作用调控因子和GAL4杂合启动子的PRS质粒.PCR扩增BGHpolyA片段,并引入需要的酶切位点.在GLP65调控区上游添加了hCMV启动子,在GAL4杂合启动子下游加入了荧光素酶报告基因.同时,为减少两个转录单元之间的潜在干扰,加入了1.2 kb的小鸡β珠蛋白绝缘子.经PCR和限制性酶切及测序证实了载体的正确性.在体外转染HEK293细胞后,运用双荧光素酶报告基因技术鉴定了该系统的调控能力.加入诱导剂RU486后,可以诱导表达荧光素酶,并在一定范围内两者呈正比,最高可以实现荧光素酶的40余倍的表达,而没有RU486时,几乎没有报告基因的表达,表明RU486诱导调控载体构建成功,可实现对目的基因的表达时间和表达水平的精确调控,为进一步的基因调控研究和基因治疗提供了良好的工具.
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