换一批
换一批禽流感病毒H5N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达
Expression of the Hemagglutinin and Neuramidinase Gene of Influenza A Virus H5N1 in E. coli
摘要目的:克隆、表达和鉴定禽流感病毒H5N1血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础.方法:在成功克隆禽流感病毒H5N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(49～1587bp)、pET32a(+)/NA(121～1141bp)、pGEX~4T-1/HA、pGEX4T-1/NA,转化大肠杆菌BL21/rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni~(2+)亲和层析柱和GSTra P4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性.结果:重组蛋白在大肠杆菌中可以高效达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致,蛋白纯度占总蛋白的90%以上.ELISA和Western blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性.结论:成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 HA、NA基因序列,为禽流感病毒H5N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础.
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